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基因编辑小鼠和胚胎移植
基因编辑小鼠是指通过基因编辑手艺对特定目的基因举行“修饰” ，从而在小鼠体内实现DNA片断的删除或添加�；虮嗉∈蟊黄毡橛糜谘芯炕蚨孕∈蠊πУ挠跋� ，也被用于构建种种疾病模子 ，模拟人类疾病的爆发生长历程以及响应药物的研发。
基因编辑小鼠的制备方法主要有两种 ，一种是ES细胞囊胚注射 ，另一种是受精卵显微注射。无论哪种方法 ，基因编辑都是在受精卵水平举行操作 ，为了拿到基因编辑动物 ，则必需经由胚胎移植 ，在动物体内发育为完整的个体。
● 基于接纳ES细胞囊胚注射方法获得基因修饰小鼠的历程如下：
先对小鼠胚胎干细胞举行基因编辑 ，将基因打靶获得的阳性ES细胞举行囊胚注射 ，再胚胎移植到假孕母鼠体内获得高嵌合小鼠 ，高嵌合小鼠进一步与野生型小鼠举行交配 ，即可最终获得基因编辑小鼠。
Fig.1 接纳ES细胞囊胚注射方法获得基因修饰小鼠的历程
● 基于受精卵显微注射手艺构建基因修饰小鼠的历程如下图所示 ，
主要包括：gRNA设计和筛选 ，sgRNA表达载体构建 ，显微注射 ，胚胎移植 ，小鼠滋生等历程。
Fig.2 接纳受精卵显微注射方法获得基因修饰小鼠的历程
胚胎移植除了可以用在基因编辑小鼠构建中 ，尚有许多主要的应用：
为了包管小鼠的康健和疾病预防 ，一样平常外来小鼠必需经由隔离和净化才华进入SPF级动物房。目今 ，净化的主要手艺是：体外受精（In Vitro Fertilization, IVF）+胚胎移植（Embryo Transfer, ET）手艺（IVF-ET） ，其基来源理：小鼠自身虽然被熏染 ，但小鼠的精子或卵细胞在体内是清洁无菌的。因此将雄鼠正法后取出精子 ，将精子激活后与超排的卵母细胞举行体外受精拿到受精卵 ，再移植到SPF级代孕小鼠的子宫中 ，这样可以获得SPF级的小鼠子女。
IVF手艺还具有一个主要应用--快速扩繁。使用IVF手艺可短时间获得大宗子代小鼠 ，并且镌汰组内小鼠周龄差别 ，提高实验数据一致性。应用于基因修饰小鼠则能够一次性获得大宗相同基因型小鼠。
在小鼠进入动物房前 ，选择IVF净化效劳 ，在净化的同时 ，还能抵达快速繁育的目的 ，同时获得更大都目的子代鼠 ，效率高 ，缩短繁育周期 ，极大地加速科研进度。
单精子显微注射手艺（Intracytoplasmic sperm injection ，ICSI） ，是指通过显微操作系统将单个精子头注入小鼠卵子胞浆内 ，再移植到代孕小鼠体内发育成小鼠的手艺。该手艺用于拯救由于精子无活力或者活力低造成雄性不育的小鼠品系。
胚胎（精子）苏醒基于胚胎（精子)冻存手艺 ，胚胎（精子)冻存常用于珍贵品系的保种 ，通过一定的降温程序及�；げ椒ソ咛ィň樱┚傩卸炒� ，这种要领可以降低品系维持本钱 ，且维持历程中不受疾病、不育等因素的影响。胚胎（精子）苏醒是指通过升温的步伐将冻存的胚胎（精子）解冻 ，存活的胚胎体外作育一段时间后移植到代孕小鼠子宫内发育 ，进而获得冻存品系小鼠活体的手艺。其中胚胎冻存相比于精子冻存具有苏醒后存活率高、移植后有身率高的特点 ，具有显着优势 ，但其冷冻手艺难度高 ，受限于专业机械--程序冷冻仪 ，建议交给专业机构来举行。
综上所述 ，小鼠的胚胎移植手艺是制备基因修饰动物、净化、保种历程中的必需的、要害的手艺手段 ，关于实验动物学研究及生命科学研究具有主要价值。
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