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手足口病是肠道病毒引起的熏染性、出疹性疾病，该病多爆发于5岁以下的婴幼儿，可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡，个体手足口病患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症，而神经源性肺水肿、肺出血和心力衰竭被以为是导致殒命的主要缘故原由。
引发手足口病的肠道病毒有20多种，包括柯萨奇病毒A组和B组、人肠道病毒71型（human enterovirus 71，EV71）以及疱疹病毒、腺病毒等，其中以柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16，CA16)和肠道病毒71型（EV71）最为常见。而绝大大都重症手足口病病例，均由EV71或CA16病毒熏染所致。
EV71属于细小RNA病毒科，肠道病毒属，主要通过粪口撒播，病毒最初定植于鼻咽部或胃肠道粘膜，侵入淋巴组织并在其中滋生，进而引起第一次病毒血症。若机体免疫力差，病毒可扩散至全身组织器官，大宗滋生后再次入血，引起第二次病毒血症，最终侵占靶器官，如脑、脑膜、脊髓、心肌和横纹肌以及皮肤黏膜组织，引起重症病变，其主要病变为神经元坏死等。
PSGL-1（P-selectin glycoprotein ligand-1）卵白是一种糖卵白，作为细胞粘附分子P-、E-、L-选择素的高亲和力反受体，加入了炎症反应历程中免疫细胞的迁徙。同时，有研究批注PSGL-1也是人EV71病毒的受体，在体外细胞实验中表达人PSGL-1卵白可以提高细胞对EV71的敏感性。由于现在的EV71小鼠模子接纳乳鼠（14日龄以内），可用于熏染研究的周期太短，且其免疫系统发育不可熟，限制了该模子在研究EV71致病机理中的应用。
中国医学科学院医学实验动物研究所刘江宁教授课题组通过建设表达人PSGL-1的转基因小鼠，以提高小鼠对EV71病毒的敏感性，从而有望提高敏感小鼠的年岁，建设成年的EV71熏染模子。
课题组以人PSGL-1的mRNA为模板，经反转录获得人PSGL-1的cDNA，将其插入pCDNA3.1(+)载体的启动子下游，构建转基因载体。载体经测序验证准确后，将其线性化并经显微注射到C57BL/6J的受精卵中，用129做假孕受体，制备转基因小鼠。人PSGl-1转基因小鼠经RT-PCR和Western blotting判断，批注人PSGL-1卵白主要在小鼠的骨骼肌和脑中表达，可检测到该基因的mRNA表达及卵白（图1）。
对10日龄人PSGl-1转基因小鼠腹腔注射熏染EV71 病毒的小鼠顺应株MP10（GenBank：HQ712020）5×106 TCID50。动物自熏染后第3天最先泛起症状，体现为体重增添变缓、弓背竖毛、后肢行动缓慢至瘫痪、殒命等症状。熏染后第4天时，动物所有体现出后肢瘫痪、阻止进食等症状，熏染后第5天动物最先泛起殒命，在10天内所有殒命，该特征类似于EV71重症熏染小鼠模子。实时荧光定量PCR检测批注病毒主要复制部位为骨骼肌和脑，病毒在熏染后第3天抵达岑岭，主要病理体现为坏死性肌炎。
相关于野生型小鼠，熏染后第3天，PSGL-1转基因小鼠的骨骼肌、脊髓和脑内的病毒载量显著高于野生型小鼠（图2A-C），可是在第5天时，该差别不再显着，批注表达人PSGL-1卵白可以一过性的增进EV71小鼠顺应株熏染小鼠。与病毒复制相一致，第3天转基因小鼠的后肢泛起双侧瘫痪，症状显着比野生型小鼠严重，但在第5天时症状类似（图2D-E）。提高病毒的熏染剂量，并不可使两周以上的转基因小鼠体现出显着的症状，批注人PSGL-1具有一定的增进EV71熏染效果。
图1. 人PSGL-1转基因小鼠判断.A，人PSGL-1基因设计；B，转基因小鼠基因型判断；C，骨骼肌和脑内人PSGL-1基因的mRNA检测；D，Western blotting检测骨骼肌和脑内人PSGL-1卵白表达检测。
图2. EV71的小鼠顺应株MP10熏染转基因小鼠和野生型小鼠. A-C，组织内病毒载量，A（骨骼�。�，B（脊髓），C（脑）；D，临床症状评分的转变曲线；E，熏染第3天和第5天时的小鼠状态照片。
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参考文献：
Jiangning Liu, Wei Dong, Xiongzhi Quan, Chunmei Ma, Chuan Qin, Lianfeng Zhang. Transgenic expression of human P-selectin glycoprotein ligand-1 is not sufficient for enterovirus 71 infection in mice. Arch Virol (2012) 157: 539-543.
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