目的 探讨 Adra1a 调理 LPS 诱导的 LBP 敲除小鼠(Lbp - / - )原代肝细胞炎症反应。
要领 使用二步 灌流法提取 WT 型、Lbp - / -型小鼠原代肝细胞,构建由 LPS 诱发的原代肝细胞原发炎症模子;接纳加入抑制剂哌唑 嗪、转染 siRNA 来下调 LBP 敲除小鼠原代肝细胞 Adra1a 的表达;抑制剂法将原代肝细胞分为 3 组划分是比照组 A、LPS 组 A、抑制剂哌唑嗪组,转染 siRNA 主要是对原代肝细胞举行分组,包括比照组 B、LPS 组 B、si?NC 组、si? Adra1a 组;将 WT 型小鼠的原代肝细胞分为两组划分为比照组(空缺比照)、LPS 组(LPS 刺激 12 h)。 本研究以 WT 型、Lbp - / -型小鼠原代肝细胞为研究工具使用 Western blot 要领验证 Adra1a 在 LPS 刺激下的转变情形,接纳 CCK?8、 qRT?PCR、Western blot 等实验要领验证哌唑嗪及 si?Adra1a 对 Lbp - / - 小鼠的原代肝细胞的炎症及存活率的改善情 况。
效果 在 LPS 刺激下 Lbp - / -小鼠的原代肝细胞 Adra1a 卵白表达显著升高(P<0.01),而野生型没有显著转变; 抑制剂哌唑嗪组及滋扰组的细胞存活率显著升高(P<0.01,P<0.05);抑制剂哌唑嗪组及 si?Adra1a 组的 TNF?α、IL? 1β 炎症因子表达情形显著降低(P<0.01),与细胞损伤及炎症相关的卵白 p?p38、p?ERK、p?JNK 的表达量也显著降 低(P<0.01)。
结论 LPS 刺激 Lbp - / -小鼠原代肝细胞后 Adra1a 表达上调、炎症信号因子上调,使用哌唑嗪与 si? Adra1a 特异性降低 Adra1a 表达后使 LPS 相关的 Lbp - / -小鼠原代肝细胞炎症因子显着下降,可验证敲除 LBP 导致 Adra1a 在 LPS 诱导的炎症调理中加入反应。
阅读原文:Adra1a调理LPS诱导的Lbp-/-小鼠原代肝细胞炎症反应.pdf
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