TEL:17312606166（伞司理）
腾博会官网临床前大动物实验中心
17312606166
实验要领原理：冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。它现实上是以水为包埋剂，将组织举行冰冻至坚硬后切片的。在冰冻切片前组织不经由任何化学药品处置惩罚或加热历程，大大缩短了制片时间。同时，由于此法不需要经由脱水、透明和浸蜡等办法，因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片，并作为快速切片的要领应用在临床诊断。
冰冻切片机
实验质料：新鲜组织
试剂、试剂盒：H2O2酒精丙酮PBSDAPI事情液中性树胶
仪器、耗材：OCT速冻架恒冷箱切片机烘箱荧鲜明微镜
冰冻切片可用于免疫荧光
实验办法：
一取材
应尽可能快地接纳新鲜的质料，避免组织爆发死后转变。
二速冻
1、将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm）。
2、如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒徐徐平放入盛有液氮的小杯内。
3、当盒底部接触液氮时即最先气化欢喜，此时小盒坚持原位切勿浸入液氮中，约莫10-20s组织即迅速冰结成块。
4、在制成冻块后，即可置入恒冷箱切片机冰冻切片。
5、若需要生涯，应快速以铝箔或塑料薄膜封包，连忙置入-80℃冰箱贮存备用。
三牢靠
1、样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻组织置于其上，4℃冰箱预冷5-10min让OCT胶浸透组织。
2、取下组织置于锡箔或者玻片上，样品托速冻。
3、组织置于样品托上，其上再添一层OCT胶，以完全笼罩为宜，速冻架（PE）上30min。
四切片
1、恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机，其基本结构是将切片机置于低温密闭室内，故切片时不受外界温度和情形影响，可一连切薄片至5-10μm。
2、切片时，低温室内温度以-15℃ ~-20℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。
3、切好室温安排30min后，入4℃丙酮牢靠5-10min，烘箱干燥20min。PBS洗5min×3。
4、举行抗原热修复，微波热修复也可，室温自然冷却�？捎�3%H2O2孵育5-10min，消除内源性过氧化物酶的活性。
五免疫荧光染色
1、冰冻切片室温晾干15min，可用含10%正常山羊血清的PBS室温关闭切片1小时（此步可不洗）。
2、滴加适当比例稀释的一抗或一抗事情液（抗体的量视组织巨细而定，原则是可以匀称笼罩组织面，且包管整个历程中不会使组织干枯）。
3、将切片放在加了PBS的免疫组化湿盒，室温孵育2小时或4℃住宿。
4、第二天先将湿盒放到37℃回温1h，然后吸收片上的一抗举行接纳，将切片插入到小染缸PBS冲洗。
5、滴加用PBS稀释好的二抗（避光）置于分子杂交箱中37℃孵育1小时�＝幽啥�，切片置于染缸内，PBS洗5min×3次。
6、滴加DAPI事情液染核，室温10-20min（事情浓度0.1%染色15min）。
7、接纳DAPI，滴加5-10μl抗荧光衰减封片剂或中性树胶，用处置惩罚清洁的盖玻片封片，即可到荧鲜明微镜或者共聚焦显微镜下视察照相。
8、做好的切片放在切片盒内，置于4℃冰箱，可生涯一周左右。
| 上一篇：PAS染色检测要领 | 下一篇：电镜样品制备要领 |
|
|
|
在线 手艺在线效劳时间：9:00-20:00 在腾博会官网，您对接的是手艺职员，而非客服传话！
电话
17312606166
微信
加微信获取对接
|
