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【动物实验】常见人类疾病动物模子构建手艺原理

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一、人类疾病动物模子看法及意义

人类疾病动物模子是指医学研究中建设的具有人类疾病模拟体现的动物实验工具和相关质料。应用动物模子是现代医学熟悉生命科学客观纪律的实验要领和手段。通过动物模子的研究 ,有意识地改变那些自然条件下不可能或禁止易扫除的因素 ,以便越发准确地视察模子的实验效果 ,并将研究效果推及于人类疾病 ,从而有助于更利便、更有用地熟悉人类疾病的爆发、生长纪律和研究防治步伐。

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二、人类疾病动物模子的分类

1. 按爆发缘故原由分类

(1)诱发性动物模子:又称之为实验性动物模子 ,是指研究者通过使用物理的、化学的、生物的和复合的致病因素作用于动物 ,造成动物组织、器官或全身一定的损害 ,泛起某些类似疾病时的功效、代谢或形态结构方面的病变 ,即为人工诱发出特定的疾病动物模子。

(2)自觉性动物模子:指实验动物未经任何人工处置惩罚 ,在自然条件下动物自然爆发或由于基因突变的异常体现通过遗传育种保存下来的动物模子。

(3)抗疾病型动物模子:是指特定的疾病不会在某种动物身上爆发 ,从而可以用来探讨为何这种动物对该病有自然的对抗力。

(4)生物医学动物模子:是指使用康健动物生物学特征来提供人类疾病相似体现的疾病模子。

2. 按系统规模分类

(1)疾病的基本病理历程动物模子:是指种种疾病配合性的一些病理转变历程模子。

(2)各系统疾病动物模子:是指与人类各系统疾病响应的人类疾病动物模子。

3. 按模子种类分类 

疾病模子的种类包括整体动物、离体器官和组织、细胞株和数学模子。整体动物模子是常用的疾病模子 ,也是研究人类疾病常用的手段。

4. 按中医药系统分类 

按中医证分类 ,动物模子可分为阴虚、阳虚动物模子、气虚动物模子、血虚动物模子、脾虚和肾虚动物模子 ,厥脱证动物模子等。按中药理论分类 ,人类疾病动物模子包括解表药动物模子、清热药、泻下药、祛风湿药、利水渗湿、温里药、止血药、止咳药、化痰药、平喘药、安神药、平肝息风药、补益药、理气药、活血化瘀药等动物模子。

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三、常见人类疾病动物模子

1.胃癌动物模子

制备胃癌动物模子的要领有 ①甲基胆蒽(MC)诱发小鼠胃癌。20g左右的小鼠 ,无菌手术下 ,在腺胃黏膜面穿挂含甲基胆蒽线结。含MC的线结是用通俗细线 ,在一端打结后 ,将线结置于盛有MC小玻璃试管内 ,在酒精灯上微微加温 ,使MC液化渗入线结 ,MC浓度为0.05%~0.1% ,每条线结含有MC约5mg。手术埋线后4~8个月可乐成诱发胃癌。②用差池称亚硝胺 ,剂量为0.25ml/kg体重 ,3个月后所有动物爆发前胃乳头状癌 ,7~8个月后有85%~100%爆发前胃癌。昆明种动物最敏感。

2. 消化性溃疡动物模子

(1)应激性溃疡模子:选用大鼠 ,禁食24~48h ,将大鼠牢靠在鼠板上 ,笔直浸入20℃~23℃的水浴中 ,水面平至大鼠的剑突。浸泡20~24h 后 ,将大鼠正法 ,翻开腹腔 ,先结扎幽门 ,再用注射器将1%的福尔马林8~10ml 从食管注入胃内 ,结扎贲门 ,取出全胃 ,30min后沿胃大弯剖开 ,便可见溃疡。此法利便简朴 ,乐成率高 ,是研究抗溃疡药物的常用模子。

(2)组胺性溃疡模子:选用大鼠 ,禁食24h 可以饮水 ,腹部皮下注射磷酸组胺50 mg/kg ,2h后再注射1次 ,3h 后正法动物 ,按上述要领牢靠胃。此法也可诱发食管、胃、十二指肠等爆发溃疡。是研究溃疡爆发气制及治疗药物的常用模子。

(3)水杨酸性胃溃疡模子:选用大鼠 ,禁食24h ,把水杨酸按100mg/kg灌胃 ,4h 后正法 ,按上述要领牢靠胃。

(4)结扎幽门法溃疡模子:选用大鼠 ,麻醉后在无菌手艺下结扎幽门。术后禁食、禁水 ,19h 后正法 ,按上述要领牢靠胃。此模子适合做探索抗溃疡病药物研究和胃溃疡发病机制方面的研究。

3. 高血压动物模子

(1)肾动脉狭窄性高血压模子:狗或家兔麻醉后取俯卧位 ,从脊柱旁1.5~2cm处最先 ,右侧顺肋骨缘 ,左侧在肋骨缘约两指宽处作4cm的皮肤切口 ,疏散皮下组织腰背筋膜 ,切开内斜肌筋膜 ,推开背长肌 ,袒露肾并小心地钝性疏散出一段肾动脉 ,选用一定直径的银夹或银环套在肾动脉上造成肾动脉狭窄。若是是单侧肾动脉狭窄 ,则在距离10~12d后将另一侧肾摘除。手术几天后 ,血压最先升高 ,1~3个月后血压升至岑岭 ,并可恒久维持下去。

(2)肾外包扎性高血压模子:肾外异物包扎 ,榨取肾实质 ,造成肾组织缺血 ,使肾素形成增添 ,血压上升。选用120~150g大鼠 ,麻醉后 ,消毒皮肤 ,沿脊椎中线切开皮肤 ,在左侧季肋下1.5~2cm和距脊椎1cm处用小血管钳脱离肌肉 ,用两指从腹下部将肾脏自创口中挤出 ,将肾脏与周围组织剥离 ,将自制的双层乳胶薄膜剪成“X”形 ,沿肾门将肾脏交织包扎。然后在对侧切开取出右肾 ,疏散后切除 ,划分缝合肌肉和皮肤创口。约20d ,30%大鼠泛起高血压。

(3)应激性高血压模子:应激性高血压大鼠模子常接纳噪声和足底电击的复合刺激 ,天天2次 ,每次2h ,约20d大鼠可形成高血压。

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4. 糖尿病动物模子

(1)病毒诱发法:选用DBA/2雌性小鼠 ,皮下接种脑炎、心肌炎病毒M型变异株4~7d后泛起显着的高血糖 ,伴有血中及胰腺中胰岛素含量降低。

(2)四氧嘧啶法:SD大鼠200g左右 ,牝牡不限 ,40mg/kg四氧嘧啶静脉注射1次 ,视察血糖 > 300mg/dl ,一连2周可以以为造模乐成。

(3)链脲菌素法:将链脲菌素在酸化心理盐水中消融成1%溶液 ,给大鼠静脉注射40~100mg/(kg·次)。视察血糖 > 400mg/dl ,一连3d即可以为是造模乐成。

(4)高糖饲喂诱发法:选用SHR/NLHCP大鼠5周龄 ,喂饲含54%蔗糖饮食。1个月时 ,视察到OGTT异常 ,6个半月时胰岛素反应异常 ,9个月时可见体重减轻、虚弱。

5. 呼吸系统疾病动物模子

(1)肺炎动物模子:在无菌操作下 ,将大鼠用20%乌拉坦麻醉后 ,仰卧牢靠于手术台 ,备皮后 ,沿颈部正中切开皮肤 ,钝性疏散皮下组织 ,袒露气管 ,用5号针头插入主支气管 ,随即注入活菌液(1×106~1×109cfu/0.25ml)0.25ml ,然后再注入0.5ml空气。取出针头 ,用小动脉夹向头侧轻夹住气管 ,随即将动物置头向上位置摇动30s ,以利于细菌匀称漫衍于下呼吸道。松开动脉夹 ,缝合肌肉及皮肤 ,置动物头高脚低位 ,倾斜30°位置直至苏醒 ,以免胃内容物吸入。麻疹病毒肺炎模子:其操作程序与前面相同 ,注入的是麻疹病毒或活疫苗0.15~0.25ml(每只麻疹疫苗用麻疹稀释液稀释至1ml)。

(2)肺气肿模子:给动物气管内或静脉内注入一定量木瓜卵白酶、胰卵白酶、致热消融酶、败血酶以及由脓性痰和白细胞疏散出来的卵白酶等 ,可复制成实验性肺气肿。以木瓜卵白酶形成的实验性肺气肿病变显着并且典范。

(3)肺水肿模子:用氧化氮吸入可造成大鼠和小鼠中毒性肺水肿 ,或用气管内注入50%葡萄糖液引起渗透性肺水肿。切断豚鼠、家兔、大鼠颈部两侧迷走神经可引起肺水肿。静脉注入10%氯仿(兔0.1ml/kg、狗0.5ml/kg)也可引起急性肺水肿。腹腔注入6%氯化铵水溶液可引起大鼠(0.4ml/kg)、豚鼠(0.5~0.7ml/kg)肺水肿。

(4)肺纤维化模子:气管内注入博来霉素是现在最常用复制肺纤维化动物模子要领。大鼠麻醉后使之牢靠在鼠台上 ,将鼠舌拉出 ,趁动物吸气瞬间迅速将平端聚乙烯塑料管(连注射器 ,内盛博来霉素A5心理盐水溶液)通过声带启齿插入气管4~5cm ,缓慢注入博来霉素溶液 ,剂量为5mg/kg。注入药物后将动物直立旋转 ,只管使药液在肺内漫衍匀称。关于气管内给药要领 ,也可在麻醉下切开颈部皮肤 ,疏散气管 ,用4号针头刺入气管内注药 ,这在小鼠较为常见。

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