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COL1A2基因编码I型胶原卵白的pro-α2(I)链。I型胶原卵白是人体内含量最多的胶原卵白，主要在成纤维细胞中表达。成纤维细胞是保存于全身结缔组织中的细胞，包括皮肤、肌腱、韧带和骨骼，因此I型胶原卵白在为这些组织提供抗拉强度和结构支持方面起着至关主要的作用，并且加入许多生物学历程，如细胞迁徙、细胞黏赞许细胞信号传导等。 

赛业生物使用基因编辑手艺自主研发构建了Col1a2-iCre小鼠（产品编号：C001528），该模子在小鼠Col1a2基因调控元件的驱动下表达密码子优化后的Cre重组酶（iCre）。iCre重组酶表达模式与内源基因相似，且内源性Col1a2基因表达不受影响。当Col1a2-iCre小鼠与含有loxP位点的小鼠杂交后，子代小鼠可在成纤维细胞中引发由Cre重组酶介导的loxP位点间的序列重组。 

将Col1a2-iCre小鼠与条件性表达tdTomato荧光卵白的Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配，收罗子代小鼠的各组织并通过免疫荧光（IF）检测确定Cre重组酶的表达。效果显示在Cre+小鼠的皮肤、心脏和肺部组织中检测到红色荧光信号。 

在Col1a2-iCre小鼠（产品编号：C001528）中，凭证组织学形态结构剖析，推测皮肤真皮层、心肌细胞之间、心脏瓣膜及心内膜、肺支气管、肺泡中爆发Cre重组的细胞主要为成纤维细胞。因此，Col1a2-iCre小鼠可用于靶向成纤维细胞的组织特异性研究。 

答：当验证Cre工具鼠在特定组织或细胞中的重组效率时，我们经常使用Cre工具鼠与报告小鼠（如Rosa26-LoxP-Stop-LoxP-tdTomato或EGFP）交配，以视察子代中目的组织或细胞的荧光表达情形。然而，关于一些难以获取的组织或细胞，确认荧光表达可能会变得难题。在这种情形下，可以接纳以下几种要领来解决问题：

1. 细胞分选：

流式细胞术或者磁珠分选可以高效地疏散和剖析特定荧光标记的细胞群体，若是目的细胞可以从组织中疏散出来，使用流式细胞术可以来检测细胞中的荧光表达情形，适用于CD系列细胞等。 

举例：将Cd19-Cre小鼠（产品编号：I001184）与条件性表达tdTomato荧光卵白的Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配，爆发双基因杂合子代小鼠。收罗双基因杂合子代小鼠的外周血、脾脏和骨髓组织并通过流式细胞术剖析tdTomato卵白的漫衍，最终可确定Cre重组酶在B细胞中的高表达。 

2. 细胞标记物：

细胞标记物抗体可以用于识别差别类型的细胞，通详尽胞标记物和荧光的共定位能够准确定位和定量剖析特定细胞中的Cre介导的重组情形，适用于已有商业化细胞标记物的免疫细胞、神经细胞、上皮细胞、内皮细胞、癌症标记等。 

举例：Cr1-iCre小鼠（产品编号：C001391）与条件性表达tdTomato荧光卵白的Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配，爆发双基因杂合子代小鼠。收罗双基因杂合子代小鼠的脑、皮肤、肝、肾、肠、脾和肺组织等组织，使用小胶质细胞标记物IBA1抗体和Tomato红色荧光抗体共定位，最终可确认Cre重组酶主要定位于脑组织小胶质细胞中。 

3. 组织学形态结构剖析：

在免疫荧光实验中，有时需要凭证组织学形态结构来判断目的细胞的荧光信号。例如，在重大的组织样本中，细胞类型多样且漫衍重大，通过视察组织学形态可以更准确地识别特定类型的细胞。别的，在举行多种抗体同时标记时，差别的荧光信号可能会重叠或相互滋扰，或者在抗体特异性不敷高导致配景染色较强的情形下，团结组织学形态可以资助更好地判断荧光信号的泉源。这种要领在实验条件不睬想时尤为主要，有助于提高实验效果的准确性和可靠性。 

举例：本期先容的Col1a2-iCre小鼠（产品编号：C001528）由于荧光抗体与细胞标记抗体双染效果不佳，则选择组织学形态结构剖析，最终确认皮肤真皮层、心肌细胞之间、心脏瓣膜及心内膜、肺支气管、肺泡爆发Cre重组的细胞主要为成纤维细胞。 

4. 体外作育细胞

某些细胞类型由于其特殊的生物学特征，无法通过流式细胞术等手艺分选出来。这些细胞通常需要在体外作育条件下维持其特征和功效，以便举行后续的实验处置惩罚和剖析。例如干细胞、特定分解状态的细胞等。 

以上先容的要领不是仅牢靠适用于某一组织或细胞类型，可以团结应用从多个角度综合判断Cre重组酶的表达位置，提高实验效果的可靠性和准确性。