编者：1988 年《实验动物治理条例》宣布实验，在实验动物事情规范化、法制化治理，包管实验动物和动物实验的质量，推动我国科技生长和民生包管等方面施展了主要作用。特殊是在实验动物标准系统的完善、质量检测网络的建设、质量检测机构能力的提升、质量检测手艺的研究、质量检测事情的睁开等方面，取得了长足的前进与生长。
质量治理是实验动物治理的焦点和切入点。在质量治理方面，标准是依法治理的科学依据，允许证制度是依法治理的主要步伐，而质量监测则是标准能够得以落实、允许证制度得以实验的手艺支持条件包管。建设实验动物质量监测网络，依法开展实验动物质量检测，为科学羁系提供依据。
为此，借“科技资讯”之窗，陆续先容我国实验动物质量检测与评价领域所开展的事情及取得的效果。
一、课题提出的配景与意义
作为科技条件资源，实验动物是引领生命科学研究和生长的主要支持包管条件，是生命科学和生物手艺立异的基础。质量标准化是实验动物得以应用的基本条件，实验动物质量决议着生命科学等领域研究事情的质量和水平。随着生命科学和生物手艺快速生长，突显对标准化实验动物的迫切需求，特殊是国家重大疾病防治与新药创造战略的实验，以及国际科技交流的一直增添，实验动物标准系统的不完善，实验动物质量标准化水一律问题也逐渐袒露出来。
农用实验动物牛、羊、鸭、猫、水貂、猪、马等，国家并没有响应的标准。标准的缺失造成了我国大宗非标准化的实验用动物应用于教学、科研、生产及药品检定，造成了一定的经济损失和社会危害。因此我国亟需建设相关农用动物实验动物化的标准及检测要领。
与国际蓬勃国家相比，海内实验动物检测项目仍然落伍于蓬勃国家，随着全球一体化的生长，海内实验动物质量检测标准及响应检测要领已经和国际相关标准保存一定的差别，也使得一些病原微生物因我国尺度过低而随着动物引进带入海内。因此，团结我国现真相形，完善实验动物质量检测标准，响应增添检测项目，逐步与国际响应标准接轨十分须要。
近年来，随着病原微生物检测手艺的突飞猛进，现在实验动物相关检测要领亟待刷新，以提高检测效果的科学性与准确性�？乖寻壮杆偌觳馐忠�，基因芯片检测手艺，多重 PCR/荧光定量 PCR 检测等手艺近几年获得了较大的生长，已经应用于检测领域并有相关试剂盒产品问世，但在实验动物质量检测领域并未应用，实验动物质量检测效率有待提高，亟需建设多种病原微生物的团结、快速的检测要领。
在实验动物科学生长水平较高的一些国家，商品化、系列化的检测试剂盒已较为成熟。这些试剂盒的应用， 极大地知足检测事情的需要，检测事情的质量也获得了包管。虽然从外洋可以买到部分商品化供应的试剂盒， 但价钱腾贵，对我们来讲不是解决检测试剂泉源的一个切实可行的途径。为实验实验动物允许证治理制度和我国系列实验动物质量标准，增强实验动物事情的法制化和科学化治理，增进实验动物质量提高，充分验展实验动物质量检测在包管实验动物质量中的作用，研制标准化的检测试剂盒已成为当务之急。
本项目选择常用实验动物、新培育实验动物、拟实验动物化农用动物等病原微生物及寄生虫检测手艺为研究工具，以实验动物质量检测要领研究为主题，力争在 3-5 年内实现我国实验动物质量检测试剂的标准化。建设实验动物新品种的病原微生物和寄生虫检测手艺,实验动物新发熏染病病原微生物和寄生虫检测手艺, 应用新手艺刷新与完善现有实验动物熏染病病原微生物和寄生虫检测要领，参考国际先进标准建设实验动物熏染病病原微生物和寄生虫检测要领，建设质量检测新要领评价标准及评价手艺平台，推进实验动物熏染病病原微生物检测试剂的注册与工业化开发。填补我国现有实验动物质量检测试剂种类未几、质量不高、制备不规范、评价不周全、针对性不强等缺乏，富厚和完善现有实验动物质量检测要领，增进实验动物资源的开发使用，进而推动生命科学领域的研究与生长。
二、课题研究使命的主要内容及使命分工
（一）实验用动物新品种的病原检测手艺研究与应用
1.实验用猫病原检测手艺研究与应用：建设 4 种猫易感病毒病原体（泛白细胞镌汰症病毒、猫疱疹病毒、猫免疫缺陷病毒、猫杯状病毒）的 ELISA 或胶体金等检测要领。建设 2 种猫细菌检测要领。猫螺杆菌 LAMP 检测要领，猫巴尔通体荧光定量 PCR 检测要领。建设猫弓形虫 ELISA 检测要领。 在此基础上，研究制订实验用猫微生物学和寄生虫学品级标准（研究稿）及检测手艺规程（研究稿）。
肩负单位分工：吉林大学，中国食物药品检定研究院认真检测要领及标准的建设事情，河北医科大学认真 检测要领的实验验证事情。
2.实验用牛病原检测手艺研究与应用：建设 3 种实验用牛易感病毒病病原体检测要领，包括疯牛病 qPMCA 检测要领，牛熏染性鼻气管炎病毒荧光 PCR 检测要领，牛病毒性腹泻快速 RT-PCR 检测要领。建设 2 种实验用牛的易感细菌病病原体检测要领，包括：牛布鲁氏菌 PCR 检测要领、LAMP 检测要领，牛结核病双抗体夹心 ELISA 早期诊断要领。建设实验用牛人兽共患寄生虫牛肠道原虫（隐孢子虫、贾第虫等）多重快速判别 PCR 检测要领。在此基础上，研究制订实验用牛微生物学和寄生虫学品级标准（研究稿）及检测手艺规程（研究稿）。
肩负单位分工：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国农业大学、军事科学科学院野战输血研究所、内 蒙古大学和内蒙古农业大学认真响应的病毒及细菌检测要领及相关标准的制订事情，吉林大学认真寄生虫检测要领及相关标准的制订事情。内蒙古大学和内蒙古农业大学认真检测要领的验证和田间实验事情。
3.实验用羊病原微生物和寄生虫的检测手艺研究与应用：建设 4 种实验用羊易感病毒病病原体检测要领， 包括：羊痒病 qPMCA 检测要领，蓝舌病病毒抗原、抗体 ELISA 检测要领，山羊痘和绵羊痘通用 PCR 检测要领及特异性判别多重 PCR 检测要领的建设。建设 1 种实验用羊的易感细菌病病原体检测要领。包括：羊布鲁氏菌OMP2 基因快速 PCR 检测要领、BCSP31 基因 LAMP 检测要领、多重 PCR 检测要领。建设实验用羊人兽共患寄生虫羊肠道原虫（隐孢子虫、贾第虫等）多重快速 PCR 判别检测要领。 在此基础上，研究制订实验用羊微生物学和寄生虫学品级标准（研究稿）及检测手艺规程（研究稿）。
肩负单位分工：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国农业大学、军事科学科学院野战输血研究所、内 蒙古大学和内蒙古农业大学认真响应的病毒及细菌检测要领及相关标准的制订事情，吉林大学认真寄生虫检测要领及相关标准的制订事情。内蒙古大学和内蒙古农业大学认真检测要领的验证和田间实验事情。
4.实验用 SPF 级鸭病原微生物和寄生虫的检测手艺研究与应用：建设 3 种 SPF 鸭病毒的病原体检测要领， 包括：鸭肝炎、鸭瘟病毒、鸭蕴厥狻毒疏散判断及 PCR（RT-PCR）检测要领。建设 1 种 SPF 鸭细菌病病原体(李默氏杆菌或大肠杆菌) PCR 检测要领。建设 1 种 SPF 鸭球虫镜检及 PCR 检测要领。 在此基础上，研究制订 SPF 鸭微生物学和寄生虫学品级标准（研究稿）及检测手艺规程（研究稿）。
肩负单位分工：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所认真响应病毒、细菌检测要领及相关标准的制订事情， 吉林大学认真寄生虫检测要领及相关标准的制订事情。
（二）实验动物新发熏染病病原的检测新手艺集成立异与应用
1.实验动物新发熏染病监测新手艺研究与应用：小鼠新发熏染�。盒∈� K 病毒、小鼠乳酸脱氢酶升高症病毒；地鼠新发熏染�。汉禾共《尽⑿∈蟾窝撞《尽⒑锊《� 5 和吐兰 H-a 病毒；犬熏染�。嚎袢〔《尽⑷感〔《尽⑽笨袢《尽⑷投ㄌ�；猴新发熏染�。汉锱菽《�。
肩负单位分工：中国食物药品检定研究院认真小鼠、地鼠新发熏染病，猴泡沫病毒检测要领建设，中国农 业科学院哈尔滨兽医研究所认真犬熏染病检测要领及标准的建设事情。
2.检测新手艺集成立异与应用：划分建设猴 B 病毒、狂犬病病毒超迅速抗原卵白金纳米探针检测要领；建设小鼠病毒和细菌多重 PCR 检测要领；针对兔出血症病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒和熏染性犬肝炎病毒构建假病毒表达系统；实验动物寄生虫诊断手艺刷新与完善，猴结核病检测手艺刷新与完善。
肩负单位分工：军事科学科学院野战输血研究所认真超迅速抗原卵白金纳米探针检测要领建设，河北医科大学认真小鼠病毒细菌多重 PCR 检测要领建设，中国食物药品检定研究院认真实验动物中和抗体检测手艺建设，吉林大学认真实验动物寄生虫诊断手艺刷新与完善，中国农业大学认真猴结核病检测手艺刷新与完善。
（三）实验动物疫病病原诊断试剂工业化要害手艺开发与应用
1.新产品临床申报和注册：完成 4 种 SPF 鸡疫病病原/抗体检测试剂盒开发，并完成其中 2 种新产品临床申报和注册。2.新开发试剂盒工业化。
肩负肩负单位分工：动物用生物制品国家工程研究中心认真新检测试剂临床申报和注册事情，同时项目各 加入单位研发的成熟产品优先通过工程中心举行工业化开发。
三、课题研究要解决的要害手艺难点
（一）实验用动物及格的阴性与阳性血清比照收罗
虽然猫、牛、羊、鸭等已被用于科学实验，但海内并未建设标准化的实验用动物群体，因此，对这些动物所携带的病原微生物并不清晰，部分动物易感病原微生物对其自身危害小，但隐性携带率较高，阴性血清样本的获得较难题。筛选病原微生物阴性动物也是本项目的事情难点之一。同时，还应区分动物的自然熏染与免疫后抗体升高的情形，从而获得及格的阴性与阳性血清比照，这是建设实验用动物病原微生物血清学检测的基础。
（二）检测用抗体特异性和亲和力
获抱病原微生物高特异性和亲和力的病毒单抗是包管 ELISA 免疫学检测特异性和敏感性的要害，可通过筛选来获得切合检测标准的单抗，同时具备高特异性和效价的单抗可用于响应病原微生物的检测。
（三）引物及荧光探针特异性和敏感性
核酸检测探针以及 PCR 引物均是检测特异性和敏感性的要害因素，多重 PCR/荧光定量 PCR 反应系统较为重大，在生物条形码检测手艺研究中，除了要求具备高特异性和亲和力的单抗外，条形码 DNA 的荧光定量 PCR 检测也关系到检测的准确性�？墒褂蒙镄畔⒀б斓壬杓坪蜕秆『怂崽秸牒� PCR 引物，优化实验设计以确保检测的特异性和敏感性。
（四）实验动物病原微生物检测试剂的注册与工业化
实验动物病原微生物检测试剂的开发，从手艺层面剖析，对所有的项目加入单位都不难题，可是将检测要领最终开发成商品化的检测试剂，需要有较长的历程。新兽药证书是检测试剂产品孵化、转化的须要条件，本项目吸收了动物用生物制品国家工程研究中心并主要肩负实验动物疫病病原检测试剂工业化开发事情，借助其动物疫病检测制品 GMP 生产线及具有履历富厚履历的新兽药注册团队，快速推进新兽药的申报，周全提升项目效果转化、孵化能力，为项目效果的推广应用提供须要的包管，也为以后实验动物病原微生物检测试剂注册与工业化事情起到树模作用。
（五）实验用动物病原微生物标准毒株与菌种
建设实验用猫、牛、羊、鸭病原微生物检测要领，首先需要作育纯化标准毒株或菌种，在本研究需要建设的病原微生物检测手艺中，绝大大都病原微生物，海内都已经疏散了该毒的标准毒株，但猫的部分病毒病，海内并未疏散出标准毒株，在前期研究事情中，项目组从 ATCC 引进了部分标准毒株，并举行了扩着述育。由于病毒保存较大的变异性，因此，在建设检测要领时，还需要将引进的标准毒株与海内疏散的野毒株举行较量， 确保检测要领的准确性，特殊是在建设 PCR 等基因水平检测要领时，应尽可能选取病毒 N 卵白等守旧序列作为检测目的片断，以包管检测效果的准确性。
（六）实验用动物病原微生物检测中组织漫衍品貌简直定
实验用猫、牛、羊、鸭筛选出合适的病原学检测要领也多有差别，每种重大疫病在动物体内的熏染发病机制不尽相同，特殊是新发熏染性疾病病原，面临的第一个问题是疫病爆发模式，差别疫病病原在动物体内差别组织漫衍品貌（组织嗜性）差别，因此统一泉源样品（如肝脏样品或血清样品）针对多种疫病病原检测的敏感性不尽相同，建设多种重大疫病病原学团结判别检测要领时需确定合适采样部位。
（七）生物清静问题
本项目所涉及的牛海绵状脑病、羊痒病、蓝舌病等为国家划定的一类动物疫病，需要在动物生物清静三级以上实验室开展相关研究事情，申请单位虽都已经具备响应实验室，但在研究事情中仍需阻止病原微生物的泄露，同时，应增强对实验室及加入研究事情的研究生举行培训，严防病原微生物对实验职员爆发危害。
四、课题研究取得的效果
课题组经由三年的团结攻关，牢牢围绕实验用动物病原分子生物学快速检测新手艺研究与应用这一领域开展了深入系统的研究，主要对实验用动物新品种的病原检测手艺研究与应用、实验动物新发熏染病病原的检测新手艺集成立异与应用、实验动物疫病病原诊断试剂工业化要害手艺开发与应用方面开展研究事情。
（一）实验用动物新品种的病原检测手艺研究与应用
建设了猫疱疹病毒Ⅰ型 PCR 检测要领、抗体 ELISA 检测要领；猫疱疹病毒Ⅰ型抗体 ELISA 检测要领的；猫细小病毒 PCR 检测要领的建设；猫细小病毒和猫疱疹病毒 I 型荧光定量 PCR 检测手艺；猫细小病毒和猫疱疹病毒 I 型环介导等温扩增检测手艺；猫杯状病毒胶体金及 ELISA 检测试纸条；猫沙门氏菌的疏散判断及 PCR 检测手艺；猫螺杆菌 LAMP 检测要领；猫嗜肺巴斯德杆菌的疏散判断及 PCR 检测手艺；猫巴尔通体实时荧光定量PCR 要领检测要领；猫弓形虫间接 ELISA 检测要领；猫弓形虫 Dot-ELISA 检测要领。实验用猫共计建设了 8 种病原体的 16 种检测要领。所建设的检测要领迅速、特异、重复性好。
建设了实验用猫病原微生物和寄生虫质量控制地方标准，完善了实验用猫标准化系统。
建设了实验用牛、羊布鲁氏菌 PCR 和 LAMP 检测要领；实验用牛、羊布鲁氏菌胶体金检测试纸条；牛病毒性腹泻-黏膜病病毒实时荧光定量 PCR 要领；羊熏染性脓疱实时荧光定量 PCR 要领；牛熏染性鼻气管炎病毒双重基因 PCR 检测要领；牛支原体 PCR 检测要领；实验用牛的疯牛病、羊的羊痒病 qPMCA 手艺检测要领；牛病毒性腹泻抗原、抗体 ELISA 检测要领；牛结核病双抗体夹心 ELISA 早期诊断要领；山羊痘和绵羊痘 PCR 检测手艺； 山羊痘和绵羊痘病毒 qPCR 检测要领；羊蓝舌病病毒抗原、抗体 ELISA 检测要领；实验用牛十二指肠贾第虫、细小隐孢子虫与安氏细小隐孢子虫三重 PCR 检测要领；实验用羊贾第虫与隐孢子虫双重 PCR 检测要领。实验用牛共计建设了 17 种病原的 18 种检测要领。所建设的检测要领迅速、特异、重复性好。
建设了实验用牛、羊的病原微生物和寄生虫质量控制地方标准，完善了实验用牛、羊标准化系统。
建设了实验用 SPF 级鸭鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒病原疏散判断要领；鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒二重 PCR 检测要领；鸭蕴厥狻毒 PCR 检测要领的建设；禽致病性大肠杆菌多重 PCR 检测要领；鸭球虫 PCR 检测要领。实验用SPF 鸭共计 5 种病原 6 种检测要领。所建设的检测要领迅速、特异、重复性好。
建设了实验用 SPF 级鸭的病原微生物和寄生虫质量控制地方标准，完善了实验用 SPF 级鸭标准化系统。
（二）实验动物新发熏染病病原的检测新手艺集成立异与应用
建设了小鼠 k 病毒 PCR 检测要领；猴泡沫病毒（SFV）RT-nestPCR 检测要领；猴泡沫病毒血清学检测要领； 猴副流感病毒 PCR 检测要领；大、小鼠多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、肺支原体和肺炎克雷伯杆菌实验动物病原体多重 PCR 检测要领；小鼠金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌和肺支原体多重PCR 检测要领；大鼠细小病毒 H-1 株 PCR 检测要领；大鼠冠状病毒、仙台病毒的多重 PCR 检测要领。共计建设了 15 种病原的 8 种单项或多重检测要领。
建设了猴 B 病毒、狂犬病病毒的超迅速抗原卵白金纳米探针检测手艺；猴 B 病毒和人疱疹病毒判断手艺； 小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR 检测要领；狂犬病病毒 RT-PCR 和荧光定量 PCR 检测要领；犬细小病毒 PCR 及荧光定量检测要领；犬伪狂犬病毒 PCR 及荧光定量检测要领；犬嗜血巴尔通体 PCR 及荧光定量检测要领；犬瘟热病毒（CDV）假病毒系统；犬细小病毒（CPV）假病毒；犬腺病毒 2 型病毒假病毒；兔出血症病毒假病毒；鼠毛滴虫巢式 PCR 检测要领；兔艾美尔球虫巢式 PCR 检测要领。共建设了 13 种病原的 19 种检测新手艺。
共计建设了 15 种病原的 8 种单项或多重检测要领。共建设了 13 种病原的 19 种检测新手艺。
以上所建设的检测要领迅速、特异、重复性好。
（三）实验动物疫病病原诊断试剂工业化要害手艺开发与应用
完成禽白血病群特异性抗原 ELISA 检测试剂盒；鸡熏染性法氏囊病病毒 ELISA 抗体检测试剂盒；鸡熏染性法氏囊病病毒琼脂扩散抗原、及阴阳性血清；禽白血病病毒群特异抗原检测试纸条的工业化开发。新开发鸡熏染性支气管炎病毒 ELISA 抗体检测试剂盒 1 项，预计后续也将申报新兽药临床试验。
课题执行历程中，共申请国家发明专利 10 件，授权 4 件；获新兽药证书 2 项；揭晓论文 54 篇，其中SCI 收录文章 20 篇；制订并公布实验用猫微生物、寄生虫吉林省地方标准 2 项；作育硕士研究生 16 名、博士研究生 5 名、博士后 2 名；完成实验动物从业职员课本 2 部，组织天下实验动物质量检测手艺培训 2 次，培训相关检测职员 150 人次。
最终完成了使命书中划定的各项研究内容和审核指标。五、快检手艺在我国实验动物病原学检测中应用的展望实验动物是引领生命科学研究和生长的主要支持包管条件，是生命科学和生物手艺立异的基础。质量标准化是实验动物得以应用的基本条件，实验动物质量决议着生命科学等领域研究事情的质量和水平。虽然经由课题组 3 年不懈起劲，建设了一批实验动物质量检测要领新要领，新手艺，新试剂，可是距离我国现在实验动物质量检测的需要仍有不小的差别。
（一）实验用动物方面尚有很长的路要走
针对实验用动物新品种质量控制方面本课题由于一直的前期组合，包括了 4 个新的实验用动物新品种（猫， 牛，羊，鸭），虽然各个单位在差别的领域保存各自的优势，可是由于各个新品种的研究基础差别，实验动物标准化水平差别，群体规模也差别，本课题虽然很好的整合了各个加入单位的优势实力，集中攻关，但研究内容过于繁杂，难免会造成重此轻彼的情形，各个物种进度很难协调一致。未来科技主管部分在以后的课题顶层设计历程中，应突出简单物种，逐个重点攻关，这样更能高效的解决我国实验动物标准化所面临的问题。
（二）检测要领标准化水平不高，推广应用时间缺乏
各个课题组建设的试剂盒和检测试剂的制备以基本完成，部分专利也进入了申报阶段，部分试剂盒也进入报批阶段。可是试剂盒和检测要领的推广应用未的到充分的开发，相关检测标准的制订和公布略显落伍。各个课题肩负单位应进一步对所建设的试剂盒及检测要领举行标准化开发，进一步制订响应的检测标准，将所建设的检测要领举行充分的推广应用实践，更好的为科研生产效劳。
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